紫外可見分光光度計(jì)的應(yīng)用-用雙波長(zhǎng)法測(cè)定混濁樣品

紫外可見分光光度計(jì)的應(yīng)用-用雙波長(zhǎng)法測(cè)定混濁樣品 由于一些材料成分復(fù)雜和樣品混濁，給分光光度法帶來了困難。為此，或是改變材料本身，如從制樣考慮，降低懸浮液的混濁度；或從改進(jìn)儀器著手，如用積分球的辦法收集散射光；或用乳白玻璃法減輕散射的影響，但都不能從根本上解決問題。1951年B.Chance及其同事為了研究細(xì)胞色素，對(duì)儀器和測(cè)定技術(shù)作了進(jìn)一步的改進(jìn)，摸索了雙波長(zhǎng)法，試制了臺(tái)雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)。

以后，Bulter和Bruit教授用此法來測(cè)定水果成熟的程度。雙波長(zhǎng)法解決了由于樣品混濁而引起的測(cè)定誤差。同時(shí)，這種新的設(shè)計(jì)還帶來了許多優(yōu)點(diǎn)。 由于樣品混濁產(chǎn)生的散射和非特征吸收信號(hào)常常干擾欲測(cè)的特征吸收信號(hào)，致使測(cè)定失敗。尤其在進(jìn)行動(dòng)力學(xué)測(cè)量中發(fā)生變化，如中間產(chǎn)物（它們可能就是欲測(cè)的組分）存在的時(shí)間短，且散射的情況可能在測(cè)定過程中發(fā)生變化，這就更增加了測(cè)量的困難。為了除去這些非特征信號(hào)，從理論上說可以有三種辦法：電學(xué)法、雙光束法和雙波長(zhǎng)法。前二者都有不可克服的困難。雙波長(zhǎng)法是不用參考溶液，是兩個(gè)不同波長(zhǎng)的單色光交替通過代測(cè)的混濁樣品，然后對(duì)通過此樣品的兩個(gè)波長(zhǎng)的吸收信號(hào)進(jìn)行測(cè)量并加以比較。

如把一個(gè)波長(zhǎng)λe選在欲測(cè)組分吸收帶的峰值上，另一波長(zhǎng)λR選在欲測(cè)組分吸收帶的凹谷上，那末這兩個(gè)波長(zhǎng)的光束通過樣品后所引起的吸收信號(hào)差就應(yīng)該僅僅是欲測(cè)的特征信號(hào)了。B.Chance根據(jù)這一設(shè)想設(shè)計(jì)了*臺(tái)雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，雙波分光光度計(jì)已越來越完善了。