用分光光度計(jì)測(cè)得的吸光度受哪些因素影響

物質(zhì)本身性質(zhì)決定,光的波長(zhǎng),溶液濃度,濃度越大,吸光度越大,溶液厚度,越厚,吸光度越大.
1、 受有色物質(zhì)穩(wěn)定性的影響；
2、受比色皿潔凈度和配對(duì)性的影響；

3、受參比溶液版選擇權(quán)的影響；
4、受儀器波長(zhǎng)精度的影響；
5、受分光光度計(jì)穩(wěn)定性的影響；
6、受儀器吸光度測(cè)定準(zhǔn)確性的影響；
7、受檢測(cè)人員技術(shù)水平的影響；
8、受顯示溶液配制濃度誤差的影響。
　一、樣品的稀釋濃度

    樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素，由于樣品中不可避免存在一些細(xì)小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測(cè)試效果。為使較大程度減少顆粒對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值在0.1-1.5A。在此范圍內(nèi)，顆粒的干擾相對(duì)較小，結(jié)果穩(wěn)定。從而意味著樣品的濃度不能過低，或者過高(超過光度計(jì)的測(cè)試范圍)。

　二、核酸本身物化性質(zhì)

　　溶解核酸的緩沖液的pH值、離子濃度等在測(cè)試時(shí)，離子濃度太高也會(huì)導(dǎo)致讀數(shù)漂移，因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液(如TE)可大大穩(wěn)定讀數(shù)。核酸的吸光值受pH值和緩沖液離子濃度影響。只有在一定的pH值和低離子濃度的條件下(如10mMTris-HClpH8.0)，才能得到精確的檢測(cè)結(jié)果。水的pH值不穩(wěn)定，可能導(dǎo)致檢測(cè)誤差。一些緩沖液在紫外范圍內(nèi)存在自身吸收，為了確保準(zhǔn)確測(cè)量，請(qǐng)使用與懸浮或洗脫樣品時(shí)相同的緩沖液。

　三、分光光度計(jì)操作因素

　　1、使用儀器前，使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理，以及各個(gè)操縱旋鈕之功能。

　　2、儀器應(yīng)放在干燥的房間內(nèi)，使用時(shí)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺(tái)上，室內(nèi)照明不宜太強(qiáng)。熱天時(shí)不能用電扇直接向儀器吹風(fēng)，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。

　　3、在未按通電源之前，應(yīng)該對(duì)儀器的安全性能進(jìn)行檢查，電源接線應(yīng)牢固，通電也要良好，各個(gè)調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再按通電源開關(guān)。在儀器尚未接通電源時(shí)，電表指針必須于“0"刻線上，不是這種情況可以用電表上的校正螺絲進(jìn)行調(diào)節(jié)。

　　4、若大幅度改變測(cè)試波長(zhǎng)，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正“0"和“100"點(diǎn)，然后再測(cè)量。

　　5、比色皿使用完畢后，立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。